Ag. Financiadora: FAPESP

Introdução: As infecções causadas por agentes multirresistentes são um problema de saúde mundial, levando a com altas taxas de mortalidade. A rápida identificação dessas infecções é crítica, pois podem ser altamente contagiosas, difíceis de tratar e ter altos custos de hospitalização. Nesse contexto, o desenvolvimento de metodologias de detecção rápidas e economicamente viáveis, bem como o desenvolvimento de novas alternativas terapêuticas são desafiadores. Uma das soluções promissoras pode ser o desenvolvimento de aptâmeros de ácido nucleico capazes de interagir com bactérias. Esses aptâmeros podem ser usados??para o reconhecimento específico de agentes infecciosos ou mesmo para bloquear suas funções. A tecnologia Cell‐SELEX atualmente permite a seleção e identificação de aptâmeros.

Objetivo: Desenvolver uma metodologia in‐house para identificação de aptâmeros.

Metodologia: Inicialmente cinco cepas de A. baumannii multirresistente (MDR) foram incubadas com uma biblioteca de aptâmeros de DNA sintetizada quimicamente. Na primeira rodada de seleção, a biblioteca inicial foi incubada células bacterianas à temperatura ambiente por 25min. Após a reação de ligação, aptâmeros não ligados foram removidos após 3 lavagens em tampão de lavagem. Então, a fim de gerar moléculas de DNA de fita simples, o produto ffoi utilizado como modelo para PCR assimétrica com apenas um iniciador com objetivo de gerar uma nova biblioteca para próxima rodada de SELEX. Após 7 rodadas, quando aptâmeros de DNA de fita simples ligados a células bacterianas dominaram o pool de DNA, eles foram então clonados e sequenciadas.

Finalmente, a estrutura secundária do aptâmero foi prevista usando as ferramentas de estrutura de RNA versão 6.0.1.

Resultados: Aqui, descrevemos uma metodologia interna, baseada em célula inteira‐SELEX, para identificação de aptâmeros com rápida execução e baixo custo. Além disso, este protocolo permitiu a identificação do aptâmero A01 com toda a célula Acinetobacter baumannii como alvo. Apesar de sua capacidade de se ligar à célula da bactéria, o aptâmero não afetou o crescimento bacteriano nas condições analisadas. A01 também mostrou a capacidade de se ligar a outras células bacterianas e fúngicas.

Discussão/Conclusão: Embora as tecnologias de aptâmeros ainda enfrentam muitos desafios, incluindo a dificuldade do processo de triagem, estes dados indicam que pode se tornar uma alternativa tangível às abordagens tradicionais para diagnóstico e terapia de doenças infecciosas.